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背景：

細胞周期是指連續分裂細胞從一次有絲分裂結束到下一次有絲分裂結束所經歷的整個過程。在這個過程中，細胞遺傳物質復制并加倍，且在分裂結束時平均分配到兩個子細胞中去。細胞周期又可以分為間期和有絲分裂期，細胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整個周期可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測可用來反應細胞周期的各個期的狀況，即細胞增殖狀況。隨著細胞在細胞周期中的進展，G1期細胞具有一組配對的染色體，并且就DNA含量而言是均一的。 另一方面，在S期期間DNA的量開始加倍，因此DNA的量是G1中的量的1-2倍。 與G1中的細胞和兩組配對的染色體相比，G2 / M期的細胞具有兩倍的DNA量

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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